[目的]通过建立一个过表达T7RNA聚合酶（RNAPT7RNA　polymerase）的慢病毒系统，构建稳定表达T7RNAP的BHK－21细胞系。[方法]根据GenBank公布的大肠杆菌BL21（DE3）T7-RNAP基因基因组序列（登录号：NZ-CP081489．1）设计引物，将PCR扩增 T7-RNAP基因片段克隆到慢病毒载体构建pCDH-CMV－T7-RNAP-重组质粒。在筛选阳性克隆和测序鉴定后，将含有重组质粒pcdh CMV－T7-RNAP的包装系统和辅助包装质粒通过脂质体共转染HEK－293T细胞，通过包装和纯化获得了高纯度的重组慢病毒。收集的病毒液细胞感染了BHK－21细胞，infection（MOI）的多重性分别为1、5、10和20。72小时后观察荧光，筛选最佳MOI。在最佳条件下用重组慢病毒感染BHK－21细胞，通过绿色荧光蛋白、cop和GFP的表达观察感染细胞的阳性率。4g／mL嘌呤霉素被用作多轮筛选的抗性筛选材料，最终BHK－21T7获得NAP细胞系。此外，设计了三对引物对RT-PCR检测所选细胞系，并通过检测中海、肾荧光素酶（hR、luc）报告基因在实验组与空白对照组之间的活性差异，反映下游基因的能力。[结果]本研究成功扩增了大肠杆菌BL21（DE3）细胞的DNA，成功构建了重组慢病毒载体病毒，获得了滴度为1.0108 Tu/ml的重组慢病毒。成功筛选出BHK－21T7RNAP细胞系，并通过RT-PCR扩增检测到了T7-RNAP的特定DNA序列。将T7启动子驱动的hRluc质粒（pT7luchR）转染到该细胞系中，发现luchR在BHK－21T7RNAP细胞系中的活性明显高于空白对照组中的BHK－21细胞（P<0.01）。在lucT7BHK－21的基于RNAP基因筛选的结果和基于pT7启动子的RNAP基因筛查在lucT7的结果为建立luc的一个细胞系奠定了基础。