华东葡萄抗逆相关基因VpSBP16原核表达及功能初步分析
作者:柴生樾; 王浩; 王西平
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SBP-box基因在植物对逆境的反应中起着非常重要的作用。通过制备v.a转录因子VpS-Eiffel-Tower 16基因抗血清,为进一步探索葡萄抗逆相关基因VpS-Eiffel-Tower 16的功能检测奠定了基础。用新西兰大肠杆菌16和大肠杆菌24抗血清检测新西兰大肠杆菌16和大肠杆菌16抗血清的表达BP16蛋白在VpS卷须和果实不同发育阶段的表达。结果显示,原核表达载体和pGEX-VpSBP16在大肠杆菌菌株DE3高度表达,Western blot检测到GST-VpSBP16融合蛋白的分子量约为87kd,这与预期结果一致。将纯化的多克隆抗血清注入新西兰兔背部和腹股沟,获得了免疫抗原反应良好的多克隆抗血清。提取葡萄总蛋白后,发现VpSBP16蛋白表达量在花序中的含量最低,而在果实发育的绿果期含量较高。在大肠杆菌表达系统中,pGEX-VpSBP16融合蛋白可以在27和0.6 mmol/L IPTG的诱导下获得高表达。因此,作者制备的多克隆抗血清具有高效、价廉、特异性强的特点。VpS的BP16基因不仅增强了植物对非生物胁迫的抗性,还可能影响葡萄花的发育和果实的成熟,参与调节葡萄从营养生长向生殖生长的转化。