抗大鼠Nogo-A-Δ2特异性多克隆抗体的制备及鉴定

作者:霍景瑞; 王蕾; 田毅; 张国安; 孙文杰; 杨晓晖; 刘英富; 刘颖
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目的制备抗大鼠生长抑制因子a(Aristole-a)氨基末端序列Aa1~172(Nogo-A-2)的兔特异性抗体,并鉴定其特性。方法从原核表达系统中获得No-go-A-2(NA2)蛋白,以NA2纯化蛋白纯化的血清作为抗原。同时,在N-羟基琥珀酰亚胺活化后,从琼脂糖凝胶纯化了Na2。偶联NA2抗原免疫后,纯化血液,获得兔抗NA2抗体。在ELISA检测到纯化抗体的效价。Western blotting分析了抗体的特异性。结果通过原核表达大肠杆菌(Escherichia coli、E coli)并在Ni柱亲和大耳白兔纯化,构建了pET-24a-NA2表达载体,获得了用于免疫的NA2纯蛋白。在免疫大耳白兔获得抗血清后,用偶联NA2蛋白的琼脂糖亲和填料对免疫血清进行特异性亲和纯化,获得效价高(1110~6),特异性好的兔抗鼠Na2特异性抗体。结论本研究成功制备了可识别NA2结构域的特异性兔多克隆抗体。