为了了解不同来源玉米自交系灰斑病抗性位点的分布，探索利用分子标记筛选玉米灰斑病抗性种质，根据国家标准（NY/T 1248.11-2016）对26个玉米骨干自交系进行了人工接种和鉴定，选择6个与灰斑病抗性的主要效应（或基因）密切相关的分子标记进行分子检测。结果表明，经接种鉴定，有15例表现为中度以上耐药性，其中高抗4例，疾病11例。结合接种鉴定和分子标记检测，供试材料的抗病位点主要集中在KHB5、qRgls2.04、qRgls1．06、qRgls2.07和qRgls3.02。标记物umc2614和TID5306可以检测与Qi 319（高抗）（KHB5和qRgls2.04）一致的抗病基因座。umc1972、umc1042和bnlg1523可以检测到与t 32（高抗）一致的抗病基因座（qRgls1．06、qRgls2.07和qRgls3.02），接种鉴定和分子检测结果一致。结果表明，分子标记的检测可以有效地辅助玉米抗灰斑病种质病的筛选，对玉米分子育种具有重要意义。