毛壳素对绒山羊ADSCs组蛋白甲基化修饰的影响研究
作者:孙浩; 者小书; 张文奇; 郝斐; 李文楠; 刘洁; 刘东军
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为了探索毛壳素对间充质干细胞(gADSCs)羊绒山羊脂肪和组蛋白甲基化改性差异的影响。本研究采用不同浓度的几丁质对gADSCs进行不同时间的处理,以筛选对细胞活性影响最小、能最大程度抑制gADSCs组蛋白甲基化的药物处理浓度和时间。以最佳药物浓度和时间治疗组为实验组,以非药物治疗组为对照组,通过实时荧光定量PCR检测H3K9me2和H3K9me3甲基甲基化相关酶和胚胎发育多潜能基因mRNA表达水平的变化,检测了几丁质对组蛋白H3K9me2和H3K9me3蛋白表达水平的影响。结果表明,nmol-L-1毛滴虫蛋白在gADSCs处理48小时后对细胞活性几乎没有影响,在组蛋白甲基化转移酶和G9A的表达显著降低(P<0.05)。实时PCR结果显示,H3K9在me2和H3K9me3甲基化转移酶EHMT1、EHMT2、Suv39h1和Suv39h2的表达显著降低(P<0.05),4D在H3K9me2和H3K9me3、甲基化酶KDM3A、KDM3B、KDM4B和KDM的表达显著增加(P<0.05),多潜能性相关基因Sox2、OCT4和NANOG表达量的表达显著增加(P<0.05)。免疫荧光和WB的结果显示,治疗组H3K9me2蛋白水平没有显著变化,但H3K9me3蛋白水平显著降低(P<0.05)。(结论)20nmolL-1的几丁质处理gADSCs48小时可显著减少组蛋白H3K9me2和H3K9me3的甲基化修饰,并提高多潜能性相关基因的表达。