一种基于野田村病毒的递送功能性siRNA表达系统构建
作者:马立婷; 田忠慧; 李杨
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RNA干扰(RNAi)是由双链RNA和靶向同源基因公司共同开发的转录后基因沉默技术。它可以抑制细胞中同源基因的表达。因此,它常被用来验证特定基因的功能,但其效率和脱靶效应亟待解决。野田村-病毒(nodamura,virus,NoV)拥有简单的基因组结构和广泛的感染宿主。它有望成为研究体内基因功能的工具。我们实验室之前的研究表明,在哺乳期小鼠感染缺失RNAi通路抑制子蛋白B2NoV后,可以在宿主中检测到大量病毒衍生的siRNA(vsiRNAs),这些siRNA可以与Argonaute蛋白结合,并介导同源病毒基因组的裂解,从而达到抗病毒的效果。基于NoV的上述重要特征,本实验建立了一个新的RNA病毒载体系统,用于输送外源性小干扰RNA(small interfering、RNA、siRNA),该系统可以拯救含有一些EGFP片段的NoV重组病毒(214bp)。vsiRNAs可以在注射重组病毒的乳鼠中检测到。经过分析,靶向EGFP的vsiRNAs占nt v和siRNA21-23个国家总数的15.19%。这些基因可能会抑制EGFP的基因表达。