线粒体钙离子单向转运体对脑胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响
目的研究线粒体钙离子单向转运体(MCU)对脑胶质瘤干细胞胶质瘤细胞增殖和自我更新的影响,探讨MCU作为胶质瘤治疗新靶点的可能性。方法采用RT-PCR方法检测脑胶质瘤干细胞(T456、T4121、T387和T3832)和胶质瘤(U87和U251)细胞中MCU和mRNA蛋白在实时荧光定量PCR和Western印迹法的表达。构建了shNT、shMCU#1和shMCU#2质粒,并用于感染胶质瘤干细胞T387、T4121、T3832和T456细胞系。分别获得shNT对照、shMCU#1和shMCU#2四个细胞的敲除细胞,并通过RT-PCR检测MCU的敲除效果。将上述细胞接种到96孔板,用celliter glo?培养?使用Luminescent细胞活力检测试剂盒检测细胞活力。第6天,用成像显微镜拍摄每个孔内形成的肿瘤球的大小,并统计各组肿瘤球的数量。脑胶质瘤干细胞(T456和T4121)、神经干细胞人(16157)和星形胶质细胞人(NHA)接受了MCU抑制剂和DS16570511的治疗。分别设溶剂对照组(0.1%DMSO)、DS16570511 25和50mol·L-1组。在第0、2、4和6天检测细胞活力,并在第6天检测肿瘤球形成的大小和抛光细胞的状态。在LUCshnt大楼,LUC-shMCU#1和LUC-shMCU#2的质粒被用来将磷酸钙转染法包装病毒感染到T387和T4121细胞,然后被感染的细胞被注射到BALB/C裸小鼠的大脑中。之后一段时间后,在小鼠大脑中形成了原位脑胶质瘤移植瘤。25天后,用IVIS活体成像系统对小鼠脑进行生物发光检测,观察小鼠脑内肿瘤的形成。实验结束后,统计各组小鼠的存活时间。结果MCU在上述四种胶质瘤干细胞细胞中的表达均高于胶质瘤细胞Lebanda和U251。与shNT对照组相比,shMCU#1和shMCU#2四个胶质瘤干细胞基因敲除组的MCU蛋白表达、细胞活力和肿瘤球数量显著减少(P<0.01)。与溶剂对照组相比,DS16570511 25mol·L-1可显著抑制T387、T4121和16157细胞的活力,但对NHA细胞的抑制相对较小(P<0.05)。S1657051150mol和L-1可抑制T387、T4121、16157和NHA细胞的生存能力(P<0.01)。体内成像显示,与对照组相比,T387和T4121细胞形成的肿瘤区域的生物发光在击倒MCU后显著降低。对照组小鼠的存活时间为35天,而荷瘤小鼠在击倒MCU后的存活时间延长了30天(P<0.01)。结论击倒MCU可抑制脑胶质瘤干细胞的增殖和自我更新能力,延长颅内原位肿瘤小鼠的生存时间。