目的：研究穗花杉双黄酮（AF）对骨肉瘤细胞增殖的影响及其分子机制。方法：采用CCK-8法筛选AF抑制骨肉瘤细胞增殖的有效浓度。采用细胞周期流式细胞术检测AF对骨肉瘤细胞G1期和S期分布的影响。通过免疫荧光、荧光定量PCR和Western blot检测AF对骨肉瘤细胞增殖相关基因和蛋白表达的影响。结果：当AF浓度为75mol/L时，可显著降低骨肉瘤细胞的存活率（P<0.05）。促进骨肉瘤细胞阻滞于G1期，不能进入S期，抑制骨肉瘤细胞连环蛋白核的表达。AF可增加P-21　的mRNA和蛋白表达（P<0.05），降低连环蛋白和细胞周期蛋白D的mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论：AF可通过上调p21的表达，下调-连环蛋白和细胞周期蛋白D1的表达来抑制骨肉瘤细胞的增殖。