在使用染料法检测功能基因的表达时，选择稳定表达的内部参考基因和高特异性的引物是保证检测结果准确性和可靠性的前提。本文在荻草谷网蚜对昆虫、nico腺嘌呤二核苷酸脱氢酶和DIMT（dimethyladenosine　transferase）的常见内部参考基因进行了基因克隆、序列分析、不同年龄的时间序列分析和基因表达稳定性评估。这两个基因在GenBank的注册号是OL·基770461和OL·770462。NADH和DIMT基因克隆的序列与基于高通量测序技术的预测高度一致，但仍然存在差异。以actin为内参数，分析两种表达谱。结果表明，它们的表达是稳定的，并且在年龄上没有显著差异。从高到低的稳定值为actin、NADH和DIMT。稳定值彼此接近，远低于1.5的阈值。上述研究结果表明，尽管通常用作内部参考基因的看家基因是保守的，但物种之间可能仍存在较大的差异，直接引用其他物种的内部参考引物是不可行的。此外，尽管第一代测序技术的通量很低，但精确度非常高。与第二代相比，错误率较高，因此引物设计中使用的基因应进行克隆和测序以进行验证。最后，NADH和DIMT在荻草谷网蚜所有发育阶段的表达都是稳定的，这适用于分析蚜虫基因，尤其是不同发育阶段的基因表达差异。