十二指肠贾第虫端粒酶逆转录酶RNA结合域TRBD互作蛋白的筛选及验证

作者:明珠; 张西臣; 赵春艳; 张楠; 程淑琴; 王晓岑; 李新; 李建华; 宫鹏涛; 张媛媛
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目的筛选十二指肠、端粒酶、逆转录酶和RNA贾第虫结合域中TRBD的相互作用蛋白,并验证是否存在相互作用关系。方法采用分子克隆技术构建诱饵质粒pGBK T7-TRBD。利用酵母双杂交技术将诱饵质粒和贾第虫酵母双杂交-cDNA质粒库共转化为Y2HGold酵母感受态细胞。成功杂交的菌落在不同营养缺乏的培养基进行筛选。对筛选出的阳性克隆进行回归试验,并通过双分子荧光互补试验和GST下拉试验进一步验证了它们之间的相互作用。结果诱饵质粒pGBKT7-TRBD经双酶切和测序鉴定证明该结构正确。在贾第虫酵母双杂交-cDNA质粒库中初步筛选到5个诱饵质粒阳性克隆,即组蛋白乙酰转移酶B亚基2、bZIP家族蛋白、WD重复蛋白、NHL重复蛋白和热休克蛋白90(Hsp90)双分子荧光互补,gstpull-down试验证实阳性基因Hsp90与TRBD相互作用。结论利用酵母双杂交技术成功筛选出与十二指肠贾第虫端粒酶相互作用的Hsp人90,为进一步探索贾第虫端粒酶的调控机制奠定了基础。