SFTS病毒、登革病毒、汉滩病毒快速荧光定量RT-PCR检测方法的建立及评价

作者:胡停停;朱禹;李阿茜;孙丽娜;黄晓霞;芜为;李川;王芹;李建东;李德新;王世文;柳燕;梁米芳;王晓芳;
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目的建立三种常见高山出血热病毒(血小板减少综合征发热病毒(sftsv)、登革病毒病毒(DENV)和汉滩病毒(HTNV)的现场应急快速检测方法。方法在传统TaqMan荧光探针技术的基础上,利用国产快速一步法RT-PCR试剂盒和磁感应循环仪(MIC)qPCR仪,建立了三种常见高山出血热病毒的快速荧光定量RT-PCR检测方法。通过体外转录RNA和模拟样本、其他相关病毒的临床样本和健康人血样本验证了这三种病毒的敏感性、特异性和重复性。与传统的RT-PCR方法相比,实时荧光检测时间可以大大缩短。sftsv、DENV和HTNV的最低检测限均小于100拷贝/PCR。与模拟对照样品和其他病毒临床样品无交叉反应。检出可验证模拟阳性样本,各组CT值均小于4%。结论本研究建立的快速荧光定量RT-PCR方法具有良好的特异性、特异性和重复性。对于现场应急检测和病媒样本筛选具有一定的应用前景。