离子色谱-脉冲安培法同时测定蔗糖酶和果聚糖酶活力的方法建立
作者:刘忠莹; 王小平; 陆阳; 何叶馨; 王鑫; 黄韬睿
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本文旨在建立一种在离子色谱仪同时测定蔗糖酶和果聚糖酶活力的方法。以蔗糖为底物,通过添加蔗糖酶解、高寒还原酶水解产物中的葡萄糖和果糖,得到甘露醇和山梨醇。然后将蔗糖酶在高温下灭活,并添加到果聚糖酶,以获得含有甘露醇、山梨醇、葡萄糖和果糖的混合溶液。水-氢氧化钠溶液-醋酸钠溶液用作溶剂。在流速为1.0 ml/min,柱温为30的条件下,用carbopactm PA1 250 mm2测定四种化合物的含量。最后,用甘露醇和山梨醇的总量计算蔗糖酶的活性,用葡萄糖和果糖的总量计算果聚糖酶的活性。结果表明,甘露醇、山梨醇、葡萄糖和果糖的测定在20分钟内完成,线性相关系数大于0.999,分辨率大于1.0。蔗糖可作为底物测定果聚糖酶活性。加入1.2ml、10mg/ml硼氢化钠溶液和60水浴30分钟后,葡萄糖和果糖可分别完全转化为甘露醇和山梨醇。该方法测定的蔗糖酶活性和果聚糖酶活性与5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)和果聚糖酶活力测定的无显著差异(P>0.05)。RSD的蔗糖酶活性和果聚糖酶活性结果分别为2.0%和1.7%,具有良好的精密度,该方法不涉及传统方法中使用的有毒有害试剂。因此,该方法可以同时测定蔗糖酶和伊氏酶的活性,也为其他酶活性的测定提供了新的思路。